對骨修復材料進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗研究時(shí)，連帶植入物進(jìn)行病理組織切片，可以更好地研究植入的骨修復材料的修復效果，更利于觀(guān)察修復材料與骨組織界面的結合情況。植入的骨修復材料及骨組織的質(zhì)地都很堅硬，如果使用常規石蠟包埋組織切片，需要先剔除植入物，再對骨組織進(jìn)行脫鈣處理。人為剔除植入物，可能使原有的組織結構形態(tài)發(fā)生改變，對評價(jià)植入物與周邊組織的結合情況造成一定的影響，最終影響后期的評價(jià)分析；脫鈣處理會(huì )使組織細胞皺縮，同時(shí)會(huì )破壞骨的礦化結構。相較于以上技術(shù)，硬組織切磨技術(shù)具有多種優(yōu)勢：無(wú)需剔除植入物及進(jìn)行脫鈣處理，植入物-組織界面不會(huì )被破壞，保持了組織與植入物之間原有的組織結構形態(tài)，且完整地保存了骨組織的礦化結構，經(jīng)染色處理后，可用于骨修復材料植入后的骨組織形態(tài)計量學(xué)及骨整合相關(guān)的研究。本研究主要介紹含植入物不脫鈣骨組織病理切片技術(shù)在骨修復材料動(dòng)物實(shí)驗研究中的應用情況，以期為骨組織相關(guān)的基礎研究提供參考。
硬組織切磨技術(shù)主要是針對人工種植牙、骨和含植入物的骨組織、埋置有堅硬植入物的其他組織標本，或在動(dòng)物實(shí)驗階段進(jìn)行了親骨熒光素標記的不能進(jìn)行脫鈣的骨組織，通過(guò)脫水、浸潤、包埋處理，由硬組織切磨系統完成的組織病理切片制作技術(shù)。利用硬組織切磨技術(shù)制備的不脫鈣骨組織病理切片，常被用于骨修復材料植入后的骨整合研究及骨形態(tài)計量分析中。
骨組織結構學(xué)研究主要借助病理染色技術(shù)進(jìn)行，采用硬組織切磨技術(shù)制片的骨組織病理切片常用的組織顯色方法有蘇木精-伊紅染色（hematoxylin-eosin staining，HE 染色）法、亞甲基藍-酸性品紅染色法、Goldner's 三色染色法、甲苯胺藍染色法、Van Gieson 苦味酸-品紅染色法和茜素紅染色法。硬組織切磨技術(shù)是開(kāi)展組織細胞染色技術(shù)、熒光標記技術(shù)及研究骨修復、骨代謝情況不可替代的研究方法。
2.1 HE染色法在硬組織病理切片中的應用
HE染色法（圖1）在骨組織中主要用于觀(guān)察植入界面周?chē)仔约毎熬奘杉毎慕櫱闆r、周邊軟組織的修復能力、植入物與骨組織的骨結合率、可降解及可吸收植入物的組織反應過(guò)程及最終的結局。嚴烏毛等[1]在延期負重加載條件下納米氟磷灰石/聚醚醚酮（nano-fluorapatite polyetheretherketone，nFA/PEEK）新型種植材料骨結合效能的研究中，將植入物植入比格犬下頜骨前磨牙區，實(shí)驗結束后將含植入物的骨組織經(jīng)光固化聚合樹(shù)脂包埋后，采用硬組織切磨技術(shù)制作不脫鈣骨組織病理切片，經(jīng)HE 染色，進(jìn)行了骨結合率的測定，即在鏡下測量種植材料與骨組織接觸的長(cháng)度及植入物骨內界面的長(cháng)度，然后進(jìn)行統計學(xué)分析，結合其他實(shí)驗結果判定材料的良好生物相容性。韓雪等[2]在犬骨髓基質(zhì)細胞復合納米晶羥基磷灰石/膠原/硫酸鈣（nano-hydroxyapatite/collagen/calcium sulfate hemihydrates，nHAC/CSH）裸鼠皮下成骨的實(shí)驗研究中，將構建的組織工程骨植入裸鼠皮下組織，4周后取材，制作不脫鈣骨組織病理切片，在鏡下可清楚看到 HE染色的復合體中的骨小梁、成骨細胞及破骨細胞，證明該復合體可促進(jìn)骨組織的形成。HE染色法作為病理學(xué)中的基礎染色方法，能夠較好地評價(jià)種植材料的生物相容性和安全性，尤其是在含植入物的骨組織中，不脫鈣的切磨處理方式能夠最大限度地還原材料與組織的接觸和組織反應情況。但是，HE染色法無(wú)法較全面地評價(jià)含植入物的骨組織中纖維、軟骨及新骨的形成情況，所以，對含植入物的骨組織，常結合其他特殊染色法進(jìn)行分析。
圖1 羊脊椎骨植入（HE染色）
2.2 亞甲基藍-酸性品紅染色法在含植入物不脫鈣骨組織病理切片中的應用
亞甲基藍-酸性性品紅染色法（圖2）可以比較清楚地顯示骨組織中的成骨細胞、類(lèi)骨質(zhì)及新生骨組織，組織顏色對比明顯，較適用于測量植入物與骨結合的面積及研究骨缺損后成骨及軟組織的情況[3]。陳卿等[4]在早期負重載荷下 nFA/PEEK 成骨性能的研究中，將植入物植入比格犬下頜骨前磨牙區，實(shí)驗結束后取帶植入物的骨組織標本，經(jīng)乙醇脫水、Technovit7200 VLC 浸潤包埋后，采用硬組織切磨技術(shù)制備不脫鈣骨組織病理切片，經(jīng)亞甲基藍 - 酸性品紅染色，研究植入物骨結合形態(tài)學(xué)，染色結果顯示，原礦化骨小梁較粗大、色淺，新生骨小梁較細長(cháng)、顏色較鮮艷呈深紅色、成骨細胞核呈深藍色、細胞基質(zhì)呈淡藍色、類(lèi)骨質(zhì)呈紫灰色。于惠等[5]在不同植入扭矩的牙種植體 - 骨結合界面的組織學(xué)研究中，將BLBⅢ牙種植體植入比格犬的下頜骨，實(shí)驗結束后取帶植入體的骨組織標本行不脫鈣硬組織切磨技術(shù)進(jìn)行制片，在鏡下，經(jīng)亞甲基藍-酸性品紅染色的含植入物的骨組織中可見(jiàn)明顯的骨基質(zhì)、破骨細胞及新骨形成，且顏色區分亦較明顯。朱曉茹等[6]在采用動(dòng)物模型觀(guān)察高正加速度環(huán)境對口腔種植術(shù)后種植體-骨結合的影響研究中，將種植體植入新西蘭白兔下頜切牙部位，實(shí)驗結束后取種植體及周?chē)墙M織標本，制備不脫鈣骨組織病理切片，通過(guò)亞甲基藍-酸性品紅染色對種植體-骨結合率進(jìn)行了研究，可見(jiàn)亞甲基藍-酸性品紅染色對于含植入物的骨組織中的成骨細胞、骨基質(zhì)等的染色效果比HE染色更加直觀(guān)，組織顏色對比更加明顯，對評價(jià)骨缺損界面骨的生長(cháng)、植入物與骨組織的組織反應具有重要的意義，更適用于觀(guān)察骨結合情況。
圖2 兔股骨髁植入（亞甲基藍-酸性品紅染色）
2.3 Goldner's 三色染色法在含植入物不脫鈣骨組織病理切片中的應用
Goldner's 三色染色法（圖3）較適用于骨缺損修復后新骨形成的過(guò)程觀(guān)察，在Goldner's三色染色中，礦化骨被染成綠色，類(lèi)骨質(zhì)被染成橙色或橙紅色，而軟骨被染成紫色或藍色。韓雪等[7]在經(jīng)微弧氧化堿熱處理后修復種植體周?chē)侨睋p的愈合情況的研究中，采用犬下頜前磨牙區制備骨缺損，修復種植體植入缺損區，制備不脫鈣骨組織病理切片，經(jīng)Goldner's三色染色，觀(guān)察了種植體周?chē)侨睋p區的修復情況。楊力碩等[8] 在自體牙骨粉與異種牛骨粉修復牙槽骨缺損的對比研究中，選取家兔上頜中切牙牙槽窩為植入部位，制備不脫鈣骨組織病理切片，采用Goldner's三色染色法，觀(guān)察了骨組織及類(lèi)骨質(zhì)的形成情況，在該實(shí)驗中，通過(guò)不同周期骨粉修復骨組織的Goldner's 三色染色對比，可明顯觀(guān)察到組織切磨面的新生骨組織的形成情況，在4周時(shí)，被染成藍色的新生骨面積大，而在8周和12周的切片中，被染成藍色的新生骨面積逐漸減小，被深染的成骨細胞代替，然后與對照組進(jìn)行比較，評價(jià)其新骨的形成速率。Goldner's三色染色法是基于染料分子大小對結構致密、滲透性低或結構疏松、滲透性高的骨組織穿透效果不同進(jìn)行染色的方法。因Goldner's三色染色法具有獨特的染色優(yōu)勢，所以被作為含植入物的骨組織的修復中比較常用的評價(jià)方法。但是，Goldner's三色染色法中，新骨的顏色與Bio-oss骨粉的成骨材料顏色相近，所以，如果植入物是Bio-oss骨粉，則在觀(guān)察骨修復時(shí)應慎重選擇此方法。
圖3 羊脊椎骨植入（Goldner's三色染色）
2.4 甲苯胺藍染色法在含植入物不脫鈣骨組織病理切片中的應用
軟骨中含硫酸軟骨素，而甲苯胺藍屬于嗜堿性染料，軟骨細胞及其基質(zhì)、成骨細胞等細胞成分會(huì )被染成藍紫色，所以甲苯胺藍染色法（圖4）適用于骨缺損修復后新、舊骨的對比觀(guān)察及對新骨數量的研究。鐘建鑫等[9]在評價(jià)多孔鉭顆粒對下頜骨骨缺損的修復效果的研究中，于比格犬下頜骨缺牙區構建頜骨骨缺損模型，將多孔鉭顆粒及Bio-oss骨粉分別植入骨缺損區，實(shí)驗結束后，制備不脫鈣骨組織病理切片，經(jīng)甲苯胺藍染色后，對骨修復材料與骨組織結合情況及周邊骨組織成熟程度進(jìn)行了研究。薛喆等[10]在經(jīng)典孔隙結構鈦合金內置物在兔肱骨近端大結節處骨長(cháng)入的初步組織學(xué)研究中，將鈦合金螺釘植入制備的骨缺損模型區，實(shí)驗結束后取含植入物的骨組織標本，使用Technovit7200 VLC光固化樹(shù)脂浸潤、包埋后，利用EXAKT硬組織切磨系統制備不脫鈣骨組織病理切片，經(jīng)甲苯胺藍染色，觀(guān)察隨著(zhù)時(shí)間的演變內置物中骨長(cháng)入的情況。靳夏瑩等[11]在評價(jià)富血小板纖維蛋白單獨用于上頜竇提升種植骨再生效果的研究中，在制備富血小板纖維蛋白后，以犬上頜第一磨牙區為研究部位，實(shí)驗結束后骨組織標本經(jīng)樹(shù)脂包埋后制備不脫鈣骨組織病理切片，經(jīng)甲苯胺藍染色，于光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察了新骨形成情況。甲苯胺藍染色法是含植入物骨組織中非常常用的形態(tài)學(xué)及病理學(xué)研究方法，不僅可以觀(guān)察新生組織的鈣鹽沉積情況，統計成骨細胞數量，還常用于觀(guān)察骨缺損和樣品與組織之間的一些病理改變[12]，如能夠在鏡下看到壞死鈣化的軟骨組織及膠原纖維增生等，從而評價(jià)植入物周?chē)窃偕男Ч吧锵嗳菪浴?/span>
圖4 兔股骨植入（甲苯胺藍染色）
2.5 Van Gieson苦味酸-品紅染色法在含植入物不脫鈣骨組織病理切片中的應用
Van Gieson苦味酸-品紅染色原理與染料分子大小和組織滲透有關(guān)，可將骨組織染成紅色，將膠原纖維、肌纖維等染成黃色（圖5），在骨植入實(shí)驗中用來(lái)觀(guān)察類(lèi)骨質(zhì)的形成及植入體與周?chē)墙M織的整合程度等。王勇平等[13]在探討塑料包埋技術(shù)結合四環(huán)素熒光標記制作不脫鈣骨組織切片的實(shí)驗研究中，選取兔股骨為研究部位，進(jìn)行塑料包埋，制備不脫鈣骨組織切片，經(jīng)Van Gieson 苦味酸-品紅染色后顯示紅色區域為成熟骨組織，黃色區域為未礦化的類(lèi)骨質(zhì)。胡騰龍等[14]在顯微CT設定不同閾值范圍對評價(jià)生物活性玻璃在體內成骨結果的影響研究中，采用新西蘭大白兔股骨髁缺損模型，植入生物活性玻璃，實(shí)驗結束后，組織標本制作為不脫鈣骨組織病理切片，經(jīng)Van Gieson 苦味酸-品紅染色，最后使用IPP軟件分析紅色部分即新生骨組織在總面積中的占比，然后進(jìn)行相關(guān)性分析，探究植入物的成骨性能差異。Van Gieson 苦味酸-品紅染色由于在染色時(shí)需臨時(shí)配制，放置一段時(shí)間后酸性品紅不易著(zhù)色，且切片較易褪色（應在染色后盡快保存及分析圖像），所以在實(shí)際應用中較其他特殊染色法使用頻率略少。
圖 5 兔股骨植入（Van Gieson 染色）
2.6 ?茜素紅染色法在含植入物不脫鈣骨組織病理切片中的應用
茜素紅屬于陰離子染料，可與諸多（鈣、鈦、鋁、鋯等）陽(yáng)性金屬離子發(fā)生顯色反應，形成“鈣結節”。在骨組織中茜素紅與鈣離子形成紅色或者橘紅色的螯合物，并且顏色越深，表示該部位的骨組織鈣鹽沉積越多，所以常被用來(lái)染礦化的骨組織[15]。通過(guò)含植入物骨組織的茜素紅染色（圖6），能夠較形象地描述不同周期不同部位的含植入物骨組織中鈣鹽的沉積情況。Wise和Winkelmann[16]利用Micro-CT和茜素紅染色相結合評估了羥基脲對荷蘭兔胎兒骨骼的影響，結果顯示，Micro-CT和茜素紅染色都能夠很清晰地觀(guān)察到羥基脲對于胎兒骨骼的畸變效果，但是，Micro-CT對于鈣化程度不是很高的骨組織（邊緣位置或者新的骨組織即將形成及缺損）成像結果不明顯，而結合茜素紅染色則能夠觀(guān)察到骨組織中一些輕微的鈣化情況。
圖6 兔股骨植入（茜素紅染色）
2.7 親骨熒光素標記在含植入物不脫鈣骨組織病理切片中的應用
親骨熒光素是指能夠與骨組織中鈣離子特異性結合的熒光染料，比較常用的有四環(huán)素、茜素絡(luò )合酮、鈣黃綠素（圖7）等，注入體內后，可以與骨組織尤其是新生的骨組織相結合，經(jīng)不脫鈣硬組織切磨技術(shù)制備組織切片后，由特定波長(cháng)激發(fā)，可在熒光顯微鏡下將示蹤的骨組織呈現出來(lái)[17]。
宋亞平等[18]在三種復合型骨移植材料早期修復骨缺損的比較研究中，于比格犬脛骨干骺端制備骨缺損，將骨修復材料植入缺損區域，實(shí)驗過(guò)程中，皮下分別注射鹽酸四環(huán)素、鈣黃綠素、茜素紅進(jìn)行體內熒光標記，實(shí)驗結束后將骨組織標本制備成不脫鈣骨組織病理切片，用于測量熒光標記率，對新生骨形成量進(jìn)行了研究。周宏志等[19]在熒光標記法對“腦回形”微弧氧化表面植入物早期骨結合的評價(jià)研究中，于兔股骨髁部植入植入體，實(shí)驗過(guò)程中皮下注射鈣黃綠素，進(jìn)行體內茜素紅-鈣黃綠素雙色熒光標記，實(shí)驗結束后取骨組織標本制備不脫鈣骨組織病理切片，對骨組織礦化速率進(jìn)行了研究。
圖7 股骨髁植入（茜素紅和鈣黃綠素標記）
2.8 免疫組化在含植入物不脫鈣骨組織病理切片中的應用
通常情況下，在免疫組化染色中，骨組織幾乎都需要進(jìn)行脫鈣處理，而對于不脫鈣骨的免疫組化染色，因制片難度高，制片方式不同于軟組織或者脫鈣后的骨組織，并且骨組織中含大量鈣鹽，所以對含植入物不脫鈣骨組織的免疫組化染色研究相對較少。然而李劍等[20] 利用改進(jìn)的低溫甲基丙烯酸甲 酯（methyl methacrylate，MMA） 包埋SD大鼠脛骨，制備不脫鈣骨切片，最后進(jìn)行免疫組化和原位雜交，順利觀(guān)察到了切片中的陽(yáng)性表達，讓含植入物的硬組織切片的免疫組化染色成為可能。Knabe 等[21]在評價(jià)植入物的成骨性能中，利用乙醇固定取代甲醛，并用聚甲基丙烯酸甲酯和聚甲基丙烯酸丁酯混合包埋，最后進(jìn)行不脫鈣的切片，經(jīng)免疫組化染色，成功檢測到了陽(yáng)性信號。Yang等[22]在2019年與密歇根大學(xué)牙科學(xué)院生物與材料科學(xué)系聯(lián)合發(fā)布的一篇文章中，利用4%多聚甲醛（paraformaldehyde，PFA）固定，8%明膠包埋來(lái)處理未脫鈣的小鼠顱面組織，然后進(jìn)行SOX9免疫染色、OSX和E11/Podoplanin 雙重免疫染色，均能夠在細胞中檢測到陽(yáng)性表達。Fujihara 等[23]在利用未脫鈣骨組織的冷凍切片來(lái)探究異位礦化的骨組織形態(tài)學(xué)中，同樣使用免疫組化對ENPP1突變小鼠進(jìn)行定量評估，其樣本用0.3% 過(guò)氧化氫處理，在用馬血清封閉后，用3,3'-二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸鹽和過(guò)氧化氫顯色，最后獲得了具有陽(yáng)性反應的切片。在硬組織的制片過(guò)程中，包埋經(jīng)常要求溫度為45~55℃，且時(shí)間較長(cháng)，容易導致抗原性喪失，而通過(guò)低溫包埋或冷凍骨組織切片技術(shù)及聚甲基丙烯酸甲酯包埋甚至明膠包埋、過(guò)氧化苯甲酰等的聚合，能夠較好地維持骨組織的抗原活性，不脫鈣骨組織即能夠進(jìn)行免疫組化染色，對植入材料及骨組織進(jìn)行定位或定量研究具有重要的意義。但是，不脫鈣骨組織的免疫組化亦有明顯的缺點(diǎn)，如硬組織切片一般較厚，有時(shí)抗體無(wú)法滲透進(jìn)下層組織，可能會(huì )導致染色不均或假陰性，鈣鹽的沉積也可能造成沖洗困難等，以上情況會(huì )導致整個(gè)免疫組化的染色時(shí)間及抗體量較難控制。
骨組織形態(tài)計量學(xué)是在不脫鈣骨組織病理切片技術(shù)及活體熒光標記技術(shù)的基礎上，在二維的不脫鈣骨組織病理切片圖像上利用體視學(xué)方法，推導出反映骨重建、骨結構的三維參數，即動(dòng)態(tài)參數及靜態(tài)參數的研究方法，測定對象為不脫鈣的骨組織或是在動(dòng)物實(shí)驗階段進(jìn)行熒光標記的骨組織標本。
采用不脫鈣硬組織制片技術(shù)制備組織切片并進(jìn)行形態(tài)學(xué)定量分析，可同時(shí)測定骨組織形態(tài)結構的靜態(tài)參數和動(dòng)態(tài)參數。靜態(tài)參數用來(lái)描述骨量的多少和骨小梁的形態(tài)，可對描述骨小梁面積、厚度、分離度參數等信息進(jìn)行定量分析。在對動(dòng)物活體進(jìn)行熒光標記后，可測量的動(dòng)態(tài)參數包括骨吸收參數和骨形成參數，通過(guò)以上參數可以了解骨表面礦化量和礦化速率。黎永奇等[24] 在觀(guān)察HU-308藥物緩釋涂層對骨質(zhì)疏松大鼠植入物周骨密度、類(lèi)骨質(zhì)形成和骨吸收的影響研究中，將帶植入物的大鼠脛骨制作成不脫鈣骨組織病理切片，經(jīng)甲苯胺藍染色，對骨組織形態(tài)計量學(xué)參數（植入物螺紋內骨密度、類(lèi)骨質(zhì)周長(cháng)百分數和骨吸收周長(cháng)百分數）進(jìn)行了測定、分析。
通常情況下，對不脫鈣的骨組織及埋置有骨修復等植入物的骨組織進(jìn)行病理組織切片制作，可利用EXAKT硬組織切磨系統[25-26]。含植入物不脫鈣骨組織病理切片技術(shù)制備的病理組織切片，保持了材料與骨結合界面的完整性，是研究結合界面的重要方法，已被廣泛應用于骨修復材料的各種動(dòng)物實(shí)驗研究中，包括大動(dòng)物非臨床的實(shí)驗研究。但是，其亦存在不足，如整個(gè)制片過(guò)程較為復雜，制片操作步驟繁瑣，耗時(shí)長(cháng)，且成本昂貴；材料與組織之間的硬度與密度并不完全一致，在硬組織脫水、浸透、包埋處理過(guò)程中造成材料與組織界面間隙變寬或變窄，容易引起界面結合假象；相較于軟組織切片，難以把握染色過(guò)程（蝕刻過(guò)程等），想要獲得理想的染色切片具有一定的難度。
不同染色方法的特點(diǎn)和側重點(diǎn)各不相同，能夠具體應對不同的研究目的。對植入物與組織界面的研究，應根據植入物及觀(guān)察的組織不同選擇染色方法，甚至結合脫鈣骨的軟組織切片染色，以期得到可靠的形態(tài)學(xué)、組織學(xué)評價(jià)依據。武登誠和李盛林[27]在介紹口腔醫學(xué)中對硬組織切磨技術(shù)的應用中，利用 HE和甲苯胺藍染色硬組織切片，并對比觀(guān)察了植入界面的骨性接觸與纖維走向；Yang等[22]用HE染色和免疫熒光染色對比分析了抗體在組織中的具體陽(yáng)性表達位點(diǎn)。HE染色主要是觀(guān)察植入物誘發(fā)的骨組織的組織反應，側重評價(jià)其基本的生物相容性；亞甲基藍-酸性品紅染色主要觀(guān)察成骨細胞及新生骨等，側重評價(jià)骨生成、骨結合率及計算成骨面積；Goldner's三色染色主要觀(guān)察軟骨、類(lèi)骨質(zhì)及礦化骨，側重骨組織修復，對于不同周期的礦化程度觀(guān)察對比明顯[28]；甲苯胺藍染色主要觀(guān)察新骨形成、骨細胞、骨基質(zhì)及一些病理改變，側重骨修復觀(guān)察，而且新生骨和成熟骨之間界限清晰；Van Gieson 苦味酸-品紅染色主要觀(guān)察骨組織和膠原纖維，側重植入物與組織的整合程度；茜素紅染色主要觀(guān)察骨組織鈣鹽沉積；親骨熒光素標記主要用于示蹤，特別是對于新骨形成、骨代謝等進(jìn)行定量分析；而免疫組化主要確定骨組織中的抗原，從而進(jìn)行異位礦化定性、定量研究[3，29]。因每種染色方法均存在不足，所以在實(shí)際應用中應結合多種染色方法進(jìn)行觀(guān)察研究。
骨修復材料的骨整合研究主要是對生物學(xué)（組織學(xué)、細胞和分子生物學(xué)）方面、醫學(xué)影像學(xué)方面及生物力學(xué)方面進(jìn)行評價(jià)分析[30]。對骨組織形態(tài)結構進(jìn)行分析研究的方法很多，基于影像學(xué)技術(shù)的骨組織結構形態(tài)分析方法具有無(wú)創(chuàng )、對樣本損傷小的優(yōu)點(diǎn)，在對骨組織性質(zhì)的評價(jià)研究中優(yōu)先被選用[31]。賴(lài)春花等[32]對顯微CT與硬組織切片技術(shù)在評價(jià)牙種植體骨結合中應用的對比研究中發(fā)現，顯微CT可以宏觀(guān)地觀(guān)察到種植體周?chē)琴|(zhì)的情況，但對種植體-骨界面成骨現象顯示不夠清晰，經(jīng)不脫鈣硬組織切片組織病理染色后其對種植體-骨界面的細微情況顯示較清晰。針對一些復雜的含植入物的骨組織，顯微CT能夠構建出三維的形態(tài)，對組織進(jìn)行立體分析。Palmquist等[33]利用顯微CT及不脫鈣骨組織的甲苯胺藍染色，評估3D打印的多孔 Ti6Al4V植入的骨形成情況，發(fā)現通過(guò)甲苯胺藍染色的含植入物組織在定量組織形態(tài)計量學(xué)中與顯微CT的3D測量結果有高度的相關(guān)性；Liu等[34]在用形態(tài)計量學(xué)評價(jià)顯微CT能否作為松質(zhì)骨的3D評估分析方法時(shí)對比了HE染色結果，利用SPSS 16.0.1軟件分析，發(fā)現顯微CT與組織切片在骨體積密度、骨表面密度和小梁厚度等方面具有顯著(zhù)的相關(guān)性。因此，在對含植入物的骨形成研究中經(jīng)常使用組織形態(tài)學(xué)和顯微CT結合的方法來(lái)進(jìn)行分析，確保結果更加可靠、立體。
盡管存在難點(diǎn)，但含植入物不脫鈣骨組織病理切片技術(shù)和組織染色方法已成為評價(jià)骨整合的重要研究手段和不可或缺的一部分。
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